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本研究中使用的HPL是Stemulate公司两款人源血小板裂解液(NH和H)是在工业规模(很小批量为20L)生产的,具备高度的批间一致性。将脂肪来源的间充质干细胞在DME/F-12中添加10%Stemulate-NH或10%FBS进行传代培养11代。在DME/F-12中分别添加5、7.5或10%Stemulate-NH,并与10%胎牛血清进行比较。羊膜来源间充质干细胞也在2.5或5%Stemulate中培养,与10%胎牛血清相比。牙髓来源的骨髓间充质干细胞在DME/F-12中添加不同浓度的Stemulate-NH或Stemulate-H,并与添加10%FBS的培养基进行比较。在所有实验中,每天都监测细胞,每次传代结束时,收获细胞,并使用台盼蓝和一个自动细胞计数器计数然后继续传代。
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为了排除肝素对于细胞增长的抑制作用可能与防腐剂(这里采用苄醇作为防腐剂添加到UFH或LMWH中)有关。我们对不添加防腐剂的肝素进行了相同实验,结果对AT-MSC和BM-MSC细胞增殖抑制趋势相同。在随后的传代培养到3代中的累积的群体中,两种肝素UFH和LMWH对MSC增殖的影响也变得明显,血小板裂解液中肝素浓度较低时累积细胞群体倍增指数(cPD)较高。CFU-F的塑料粘附生长性能是MSCs培养的先决条件,在96孔板中通过有限稀释的方法结合泊松统计进行CFU-F试验,显示集落形成率CFU-F在高浓度UFH时中度降低,而在高浓度Enoxaparin(LMWH)时明显降低。这些结果表明高浓度的LMWH减少了CFU-F的形成,这与已报道的其他研究结论一致。美国Sexton Biotechnologies专注于细胞和基因zhi liao行业生产工具的开发和销售,开发了适用于CGT行业生产的工具和产品,以实现细胞制造过程的灵活自动化和规模化,从而提高临床结果成功的概率,减少上市时间和劳动力成本。Sexton目前已经商业化的产品包括CellSeal低温瓶(高通量细胞灌装系统,zhuan yong于细胞zhi liao产品的专业化存储,耐-196℃)以及人血小板裂解液生长补充剂。更多关于Sexton血小板裂解液相关产品信息,欢迎咨询上海曼博生物!
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